Prueba de susceptibilidad antimicrobiana
Las diferentes especies bacterianas tiene diferentes grados de susceptibilidad a los agentes terapéuticos. A esto se suma que la susceptibilidad puede cambiar con el tiempo e incluso durante el tratamiento por la resistencia a antibióticos. Es por esta razón, que el médico debe conocer la sensibilidad del patógeno antes de iniciar un tratamiento. Para tener así un tratamiento especifico y puede ser controlada y eliminada la infección. Cabe recalcar que existen microorganismos que tienen tratamiento especifico y no es necesario la realización de pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, salvo que presenten resistencia, tal es el caso de los estreptococos beta hemolíticos y el gonococo.
Existen diferentes métodos para evaluar la susceptibilidad de las bacterias en el área de bacteriología y a continuación se describen brevemente.
Métodos de difusión
Son los más conocidos, pero, no necesariamente los mejores. De estos métodos se conocen los siguientes:
- Método de difusión en disco o prueba de Kirby-Bauer
Es el método que tiene mayor difusión, es necesario tener la técnica bien estandarizada para obtener resultados confiables. Este método se basa en inocular una suspensión de bacterias ajustadas al 0.5 de McFarland en una placa de agar Muller-Hinton. El microorganismo se extiende por todo el medido (estría masiva) y se colocan los discos, se incuba de 16 a 24 horas a 35°C ±2 en aerobiosis. Al día siguiente se miden los halos de inhibición y se comparan con las recomendaciones de la CLSI para designar si el microorganismo es sensible, intermedio o resistente.
Existen ciertas recomendaciones que se deben seguir para poder obtener resultados aceptables:
- Atemperar las placas de agar y los discos a temperatura ambiente.
- Se tienen 15 minutos para inocular las placas una vez ajustada la suspensión al 0.5 de McFarland.
- Dejar reposar la placa de 3 a 15 minutos antes de colocar los discos.
- La distancia entre disco y disco debe ser mínimo de 2.4 mm.
- No colocar más de 12 discos en placas de 150 mm y 5 en placas de 100 mm.
2. Prueba o test E
Es un método de difusión más avanzado, ya que ayuda a estimar la concentración mínima inhibitoria (concentración más baja den antibiótico que previene el crecimiento). Son tiras que contienen un gradiente de concentraciones de un antimicrobiano. Sigue el mismo procedimiento que la prueba anterior, solo que, en este caso se observa una elipse y la línea de crecimiento que se cruza con la línea del E-test es la CMI. En placas de 100 mm se colocan 2 tiras, mientras que, en placas de 150 se pueden colocar hasta 6 tiras.
3. Métodos de dilución
Una desventaja de los métodos de difusión es que no determinan si el fármaco es bactericida. Una prueba de dilución en caldo es útil para determinar la CMI y la concentración bactericida mínima (CBM). Esta prueba se realiza haciendo una secuencia de concentraciones decrecientes del fármaco en un caldo, que luego se inocula con la bacteria a estudiar. Los pocillos que no muestran crecimiento indican que el fármaco esta en una concentración superior a la inhibitoria y por eso no hubo crecimiento, siendo el último pocillo sin crecimiento la CMI. Si se desea saber si el fármaco es bactericida, se siembra el caldo donde no hubo crecimiento en placas de medio de cultivo, si el microorganismo se desarrolla indica que el antibiótico solo es bacteriostático y no es bactericida. Este método es ideal ya que determina la CMI y la CBM lo que evita el uso excesivo o erróneo de antibióticos que pueden causas toxicidad a dosis mayores de las necesarias.
Es importante manejar controles de microorganismos y de esterilidad del medio, si el pocillo de control de esterilidad tiene crecimiento, la prueba no puede ser interpretada y se debe repetir el ensayo.
Bibliografía consultada:
Leber, Al., (2016). Clinical Microbiology Procedures Handbook, 4 edn. ASM press;USA
Tortora, GJ., Funke, BR., and Case, CL., (). Microbiology: An introduction, 13 edn. Pearson:USA